РЕМЕДИУМРЕМЕДИУМ1561-59362658-3534Joint-Stock Company Chicot144310.32687/1561-5936-2022-26-3-194-198Original ArticleОценка фармакокинетики и безопасности в исследовании биоэквивалентности воспроизведенного лекарственного препарата ПразиквантелГильдееваГ. Н.-ЧапленкоА. А.-СтепановаЕ. С.es@mda-cro.comПервый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова (Сеченовский Университет)ООО «Медикал Девелопмент Эдженси»1512202226319419821092022Copyright © 2022, АО "Шико"2022Введение. Около четверти населения мира страдают от глистных инвазий. Празиквантел - препарат для лечения гельминтных инвазий, вызванных цестодами и трематодами. Актуальной представляется разработка дженериковых лекарственных препаратов для борьбы с гельминтозами в России.Цель исследования: сравнение фармакокинетических профилей и профилей безопасности препаратов исследуемого препарата Празиквантел и референтного препарата Бильтрицид в рамках исследования их биоэквивалентности.Материалы и методы. Проведено открытое, рандомизированное, перекрёстное исследование биоэквивалентности в четырех периодах с репликативным дизайном на 32 здоровых добровольцах мужского пола.Результаты. При исследовании биоэквивалентности препаратов Празиквантел и Бильтрицид установлены схожие фармакокинетические профили празиквантела. Согласно дисперсионному анализу, факторы «Добровольцы» и «Последовательность приема препаратов» вносили основной вклад в вариабельность данных исследования. 90% доверительный интервал отношений AUC0-t, AUC0-∞ и Cmax исследуемого препарата к референтному укладывался в диапазон 80-125%. Установлено, что препараты празиквантела имеют удовлетворительный профиль безопасности.pharmacokineticssafetybioequivalencepraziquantelфармакокинетикабезопасностьбиоэквивалентностьпразиквантелВведение По оценкам ВОЗ, около 1,5 млрд человек во всем мире заражены гельминтами, передающимися через почву 1. Распространение гельминтных инвазий по миру неоднородно. Большее число гельминтозов регистрируется в тропических и субтропических регионах: Африке, Южной Америке, Восточной Азии. В России гельминтозные инвазии также достаточно распространены. По разным оценкам, в России ежегодно регистрируется 1,5-2,0 млн случаев гельминтозов [1, 2]. Постановлением Правительства РФ от 01.12.2004 № 715 гельминтозы включены в «Перечень заболеваний, представляющих опасность для окружающих». Наиболее распространены кишечные гельминтные инвазии, распространяющиеся алиментарным путём: через пищу, воду или грязные руки. Особенное внимание уделяется гельминтным инвазиям у детей. В результате кишечных гельминтозов нарушаются обмен веществ и физическое развитие в целом, страдают иммунная и пищеварительная система, особенно остро такие состояния проявляются у детей. Распространению гельминтозов способствует низкая осведомлённость населения и зачастую смазанная, неспецифичная клиническая картина заболевания. У взрослых людей преобладают бессимптомные гельминтные заболевания. Возбудителями гельминтозов человека в основном являются представители класса нематод (круглые черви), цестод (ленточные черви), и трематод (сосальщики) [3]. Дегельминтизация пациентов должна проводиться строго под контролем врача с использованием современных лекарственных препаратов. Празиквантел (ПК) - антигельминтное средство широкого спектра действия. ПК высоко активен в отношении трематодозов и цестодозов человека: шистосомозов, клонорхоза, парагонимоза, описторхоза, бычьего и свиного цепня, карликового цепня и др. ПК повышает проницаемость мембран клеток гельминтов для ионов кальция, что вызывает генерализованное сокращение мускулатуры паразитов. Также вызывает повреждение тегумента и нарушает всасывание глюкозы клетками гельминтов 2. Учитывая приведённые выше данные, разработка дженериковых препаратов ПК актуальна с точки зрения социально-экономических факторов. Цель исследования - сравнение профилей фармакокинетики и безопасности в рамках проведения исследования биоэквивалентности воспроизведённого и референтного препаратов ПК в лекарственной форме «таблетки, покрытые пленочной оболочкой», содержащих ПК в равных дозах (600 мг): Празиквантел (ЗАО «Обнинская химико-фармацевтическая компания», Россия) и Бильтрицид («Bayer AG», Германия). Исследование проводили у здоровых добровольцев мужского пола. Материалы и методы Клиническую часть исследования проводили в ГБУЗ ЯО «Ярославская областная клиническая наркологическая больница» и ООО «ЦКП «Аналитическая спектрометрия». В Министерстве здравоохранения РФ было получено разрешение на проведение клинических исследований № 467 от 18.08.2021. Работа проводилась в рамках: международной системы GCP и этических принципов WMA (Хельсинкская декларация). Дизайн исследования Исследование было спланировано как открытое, рандомизированное, перекрёстное исследование биоэквивалентности в четырех периодах с репликативным дизайном, в рамках которого сравнивали профили фармакокинетики и безопасности исследуемого препарата Празиквантел и препарата сравнения (референтного) Бильтрицид у здоровых добровольцев мужского пола. Перед включением в исследование все добровольцы (n = 32) ознакомились и подписали информированное согласие на участие в исследовании. Требования к добровольцам: возраст 19-41 год, индекс массы тела 18,5-30,0 кг/м2, масса тела выше 45, но не более 100 кг. В размер выборки было включено дополнительное количество добровольцев на случай выбывания (4 добровольца). Периоды исследования Исследование состояло из периода скрининга (≤10 дней) и 4 периодов исследования (I, II, III и IV). Между периодами исследования I, II, III и IV период «отмывки» составлял 7 дней, что согласуется с данными о периоде полуэлиминации (T1/2) ПК около 3 ч 3 и требованием 5 T1/2 в Правилах проведения исследований биоэквивалентности ЕЭС 4. На этапе скрининга оценивали соответствие добровольца критериям включения/невключения, регистрировали возраст, пол, рост, вес, индекс массы тела. Собирали медицинский анамнез, данные физикального осмотра, оценивали сопутствующую терапию. Оценивали ЧСС, ЧДД, АД, температуру тела добровольцев; проводили анализ крови (общеклинический, биохимический), анализ мочи, ЭКГ. Добровольцы включались в исследование при отсутствии отклонений от нормальных значений исследуемых параметров. Добровольцы должны были иметь отрицательные тесты на ВИЧ, сифилис, маркеры гепатита В и С, алкотестер, отрицательный тест на наличие психотропных и наркотических веществ, психоактивных лекарственных препаратов в моче. Каждому добровольцу присваивался трёхзначный рандомизационный номер методом генерации случайных чисел с использованием программы NCSS 11.0. Рандомизационный номер определял последовательность приёма исследуемого препарата (Т) и препарата сравнения (R) (TRTR или RTRT). Приём препаратов осуществлялся строго после еды. После приёма препарата в течение 24 ч добровольцы оставались под наблюдением врачей в клиническом центре. Отбор проб крови Сбор биоматериала осуществлялся в пробирки, содержащие K3-этилендиаминтетрауксусную кислоту. Точка 0 ч отбиралась до приёма препаратов и до приёма пищи. Затем доброволец принимал пищу и один из препаратов ПК (Т или R). Добровольцу устанавливали венозный катетер и проводили отбор проб крови через 15, 30, 45 мин и далее через 1, 1,25, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 5, 6, 7, 8, 10 и 12 ч после приёма препаратов. Каждая однократная (разовая) порция крови составляла 5 мл. Не более чем через 20 мин от забора крови плазму отделяли центрифугированием (10 мин; 3500 об/мин; +4°С), режим хранения биоматериала - при -70°С. Аналитический метод Концентрации ПК в биоматериале определяли с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС на системах «Shimadzu Prominence» (Япония) и «AB Sciex QTRAP 4000» (США). В качестве внутреннего стандарта использовали дейтерированный стандарт ПК-d11. Передел количественного определения ПК при помощи данной методики составил 1,5 нг/мл, линейный диапазон 1,5-900 нг/мл. Валидация методики включала исследование селективности, эффекта переноса, прецизионности и правильности в трех сериях (2 дня), допустимости разведения, степени извлечения, матричного эффекта, стабильности аналитов в растворах и биоматериале. Методика удовлетворяла всем критериям приемлемости валидации, согласно Приложению 6 Решения Совета ЕАЭК 5. Оценка безопасности Оценку безопасности исследуемого препарата и препарата сравнения проводили на основании физикального осмотра, показателей АД, ЧСС, ЧДД и температуры тела, параметров ЭКГ и лабораторных анализов: клинический и биохимический анализы крови, общий анализ мочи. На основании регистрируемых показателей, а также по результатам опроса добровольцев делали заключение о возникновении нежелательных явлений (НЯ). Фармакокинетический и статистический анализ ПК можно отнести к высоковариабельным препаратам, т. к. коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности (CVintra) фармакокинетических параметров AUC0-t и Cmax ПК составляют 35 и 50-60% соответственно. Согласно результатам исследования 6, величина CVintra для Cmax ПК составила 52%, что учитывалось при расчете объёма выборки. Для препаратов, имеющих высокую внутрииндивидуальную вариабельность по параметру Cmax (более 30%), границы признания биоэквивалентности 90% доверительных интервалов (ДИ) для отношения средних значений Cmax могут быть расширены. Расширение границ признания биоэквивалентности для параметров биодоступности (площадь под кривой - AUC) при высокой внутрииндивидуальной вариабельности не допускается. Исследования высоковариабельных препаратов можно проводить с повторным (репликативным) перекрёстным дизайном. Данные факторы учитывали при планировании исследования и расчёте объёма выборки. Расчёты (R v. 3.5.0, модуль PowerTOST v. 1.4-7) показали значение необходимого числа добровольцев не менее 28 человек для перекрёстной четырёхэтапной схемы. Фармакокинетический анализ проводили при помощи «Phoenix™ WinNonlin® v. 8.3» («Pharsight Corp.»), статистический анализ - в программе «SAS v. 9.4» в соответствии с подходами, изложенными в методических рекомендациях [4, 5]. Осуществляли многофакторный дисперсионный анализ для логарифмически преобразованных показателей Cmax, AUC0-t, AUC0-∞ наиболее критических и надёжно оцениваемых параметров: «Добровольцы» (межиндивидуальные различия), «Последовательность приёма», «Препарат» и «Этап исследования». Оценка биоэквивалентности Для оценки биоэквивалентности исследуемого препарата и препарата сравнения вычисляли 90% ДИ для отношений средних значений AUC0-t, AUC0-∞ и Cmax. Результаты Фармакокинетические данные Фармакокинетические кривые (концентрация-время) по средним значениям концентраций ПК в плазме крови добровольцев (n = 32), полученные в рамках нашего исследования биоэквивалентности, представлены на рисунке. Установлены близкие значения усреднённых концентраций ПК в плазме крови добровольцев (n = 32) после однократного приёма исследуемого препарата и препарата сравнения. Основные фармакокинетические параметры представлены в табл. 1. Сравнение фармакокинетических профилей исследуемого и референтного препаратов продемонстрировало близкие значения биодоступности (AUC0-t, AUC0-∞), значения максимальных концентраций ПК (Cmax), времени достижения максимальной концентрации (Tmax). Различия между препаратами по параметру Tmax являются статистически значимыми (Z = -2,337; p = 0,019 по критерию знаковых рангов Вилкоксона). Для исследуемого и референтного препаратов получены близкие показатели: Т1/2 (2,951 ± 1,384 и 2,771 ± 1,211 ч соответственно) и константа элиминации (Kel) - 0,275 ± 0,104 и 0,292 ± 0,114 ч-1 соответственно. Оценка биоэквивалентности В анализ биоэквивалентности были включены все 32 добровольца, отобранные на этапе скрининга. Проведён статистический анализ полученных фармакокинетических данных препаратов Празиквантел и Бильтрицид®. Рассчитанные значения 90% ДИ для отношений средних значений ln(AUC0-t), ln(AUC0-∞) и ln(Сmах) сравниваемых препаратов представлены в табл. 2. 90% ДИ отношений параметров AUC0-t, AUC0-∞ и Cmax исследуемого препарата и препарата сравнения не выходили за пределы верхней и нижней границ (80-125%), что свидетельствует о биоэквивалентности препаратов. Результаты оценки вариации данных с использованием дисперсионного анализа ln(AUC0-t), ln(AUC0-∞) и ln(Сmах) ПК после однократного приема препаратов Празиквантел и Бильтрицид® представлены в табл. 3. На основании дисперсионного анализа (ANOVA) выявлено, что к факторам, вносящим значимый вклад в наблюдаемую вариабельность данных, полученных в нашем исследовании, относились факторы «Добровольцы» и «Последовательность приёма препаратов». Вклад таких факторов, как «Препарат исследования» и «Этап исследования», был статистически незначим. Значения остаточной дисперсии использовались при расчёте 90% ДИ для отношений средних значений параметров AUC0-t, AUC0-∞ и Cmax. Оценка безопасности Ни один из рандомизированных в исследование добровольцев не покинул исследование по причине НЯ. За период проведения исследования было зарегистрировано 3 случая НЯ у 3 (9,4%) добровольцев в IV периоде в группе RTRT. Группы по количеству НЯ значимо не различались (р = 0,238). Все 3 случая НЯ заключались в возникновении у добровольцев эритропении лёгкой степени тяжести и не требовали последующего наблюдения. Все случаи НЯ имели сомнительную связь с приёмом исследуемого препарата. Обсуждение Размер выборки (n = 32) был достаточным для подтверждения биоэквивалентности препаратов, благодаря четырехпериодному репликативному дизайну. Сравнение фармакокинетики ПК при приёме исследуемого и референтного препаратов показало, что их фармакокинетические показатели (AUC0-t, AUC0-∞, Cmax, T1/2, Kel) существенно не различаются. Дисперсионный анализ выявил значимое влияние фактора «Доброволец», что указывает на высокую внутрииндивидуальную вариабельность препаратов ПК и согласуется с данными литературы 7. Тем не менее для признания исследуемого и референтного препаратов биоэквивалентными не потребовалось расширения границ признания биоэквивалентности для параметра Cmax, как это предложено в Правилах проведения исследования биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках ЕАЭС. 90% ДИ параметров отношений средних значений Cmax и AUC укладывались в допустимый диапазон 80-125%. Для ПК отмечаются дозозависимые НЯ, которые снижаются при приёме препарата вместе с пищей. НЯ в основном представлены в двух категориях: различные нарушения со стороны пищеварения (дискомфорт и боль в животе, рвота и диарея) и неврологические проявления (головная боль и сонливость) [6]. В настоящем исследовании биоэквивалентности при наблюдении за добровольцами не было зарегистрировано НЯ со стороны пищеварительной или нервной систем. Все НЯ были выявлены в последнем, IV периоде при приёме исследуемого препарата в группе добровольцев рандомизированных RTRT. Зарегистрированные НЯ выражались в эритропении лёгкой степени и не требовали наблюдения за состоянием добровольцев. Заключение Проведено открытое, рандомизированное, перекрёстное исследование биоэквивалентности в 4 периодах с репликативным дизайном, в рамках которого сравнивали профили фармакокинетики и безопасности исследуемого препарата Празиквантел (ЗАО «Обнинская химико-фармацевтическая компания», Россия) и препарата сравнения Бильтрицид («Bayer AG», Германия), содержащих ПК в равных дозах (600 мг), у здоровых добровольцев мужского пола. Установлены схожие фармакокинетические профили ПК при приёме добровольцами исследуемого и референтного препаратов. Исследуемый препарат и препарат сравнения были признаны биоэквивалентными и имеющими схожий, удовлетворительный профиль безопасности.1.Давыдова И. В. Гельминтозы, регистрируемые на территории Российской Федерации: эпидемиологическая ситуация, особенности биологии паразитов, патогенез, клиника, диагностика, этиотропная терапия // Consilium Medicum. 2017. Т. 19, № 8. С. 32-40.2.Сергиев В. П., Успенский А. В., Романенко Н. А. и др. «Новые и возвращающиеся» гельминтозы как потенциальный фактор социально-эпидемиологических осложнений в России // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2005. № 4. С. 6-8.3.Байекеева К. Т., Садыкова А. М., Сейдулаева Л. Б. и др. Повсеместно распространенные гельминтозы // Вестник Казахского Национального медицинского университета. 2017. № 1. С. 101-108.4.Лапач С. Н., Чубенко А. В., Бабич П. Н. Основные принципы применения статистических методов в клинических испытаниях. Киев; 2002. 160 с.5.Сергиенко В. И., Бондарева И. Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. М.; 2006. 304 с.6.Hong S. T. Albendazole and praziquantel: review and safety monitoring in Korea // Infect. Chemother. 2018. Vol. 50, N 1. P. 1-10. DOI: 10.3947/ic.2018.50.1.1